Антитоксические и антибактериальные сыворотки. Диагностические сыворотки для постановки реакции связывания комплемента и технология их приготовления

Антитоксические сыворотки получают иммунизацией лошадей возрастающими дозами анатоксинов, а затем и соответствующими токсинами. Сыворотки подвергают очистке и концентрации методом «Диаферм-3»,контролю на безвредность, апирогенность, затем титруют т. е. определяют содержание антитоксинов в 1 мл препарата. Специфическая активность сывороток или количество антител измеряется с помощью специальных методов, основанных на способности сывороток in vitro и in vivo нейтрализовать соответствующие токсины и выражается в международных антитоксических единицах (ME), принятых ВОЗ. За 1 ME принимается то минимальное количество сыворотки, которое способно нейтрализовать определенную дозу токсина, выражающуюся в стандартных единицах, обозначаемых как смертельные, некротические или реактивные дозы в зависимости от вида токсина и способа титрования.

Титрование антитоксических сывороток может проводиться тремя методами - методами Эрлиха, Рёмера, Района. Титрование сывороток по методу Района осуществляется с помощью реакции флоккуляции по известному анатоксину или токсину, одну Lf (Limes flocculationis -порог флоккуляции) которых нейтрализует одна единица дифтерийного антитоксина. Первичная или инициальная реакция флоккуляции наступает при соответствии количества антигенных единиц анатоксина количеству антитоксинов в исследуемой сыворотке. Исходя из результатов первичной реакции флоккуляции и ведется расчет антитоксических единиц в 1 мл испытуемой сыворотки. Однако метод Рамона является только ориентировочным.

Метод Эрлиха. Перед титрованием сывороток по методу Эрлиха проводят определение условной смертельной (опытной) дозы токсина Lt (Limes tod). Lt определяется с помощью стандартной антитоксической сыворотки, к определенному количеству которой добавляют различные объемы токсина и после выдерживания смеси при комнатной температуре (в течение 45 минут) вводят белым.мышам или морским свинкам. Затем наблюдают за животными четверо суток. За опытную дозу токсина (Lt) принимается то количество токсина, которое в смеси с 1 ME стандартной сыворотки вызывает гибель 50% взятых в опыт животных.

На втором этапе титрования к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина, смесь также выдерживают и вводят животным. По получаемым результатам производят расчет титра испытуемой антитоксической сыворотки.

Метод Рёмера. Титрование антитоксических сывороток по методу Рёмера проводится также в два этапа, но является более экономичным, т. к. опыт проводится на одном животном. Предварительно определяется опытная некротическая доза токсина - Ln (limes necrosis) введением внутрикожно морской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой. За некротическую дозу токсина принимается то его наименьшее количество, которое при внутрикожном введении морской свинке в смеси с 1/50 ME стандартной противодифтериГ"ной сыворотки вызывает на месте введения некроз на 4-5-й день. Затем различные объемы испытуемой сыворотки в смеси с оттитрованной некротической дозой токсина вводятся внутрикожно морской свинке и по результатам проводится расчет титра сыворотки. По методу Рёмера титруется противодифтерийная сыворотка.

В настоящее время выпускаются и применяются следующие антитоксические сыворотки.

1. Противодифтерийную сыворотку получгют гипериммунизацией лошадей дифтерийным анатоксином и применяют, главным образом, с терапевтической целью.

За 1 ME стандартной противодифтерийной сыворотки принимается то ее минимальное количество, которое нейтрализует 100 Dim стандартного токсина для морской свинки весом 250 г. В 1 мл сыворотки должно содержаться не менее 2006 ME. Доза вводимой сыворотки зависит от тяжести заболевания: 5000-15000 ME при легких формах и от 30000-50000 ME при токсических. Сыворотку вводят подкожно или внутримышечно.

2. Противостолбнячная сыворотка представляет собой препарат, получаемый из сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином или токсином.

За 1 ME противостолбнячной сыворотки принимается то количество сыворотки, которое нейтрализует 1000 Dim стандартного токсина для морской свинки весом 350 г.

В 1 мл противостолбнячной сыворотки должно содержаться не менее 1500 ME.

Одна профилактическая доза, равная 3000 ME столбнячного антитоксина, вводится подкожно. С лечебной целью сыворотку вводят в значительно больших дозах (100000-200000 ME) внутримышечно, внутривенно или в спинномозговой канал в зависимости от тяжести заболевания.

3. Противогангренозные моно- и поливалентные сыворотки получают гипериммунизацией лошадей анатоксинами или токсинами возбудителей газовой гангрены (Cl. perfringens, C1.oedematiens, Cl. septicum). Доза каждого типа антитоксинов- 10000 ME в 1 мл сыворотки.

Противогангренозные сыворотки применяются для лечения и профилактики газовой гангрены. С профилактической целью сыворотку вводят внутримышечно, с лечебной - внутривенно, очень медленно, капельным методом.

До установления бактериологического диагноза необходимо вводить смесь моновалентных сывороток или поливалентную сыворотку. После определения вида возбудителя, вызвавшего газовую гангрену, вводится сыворотка соответствующего вида.

4. Противоботулинические антитоксические сыворотки А,В, Е получают от лошадей, гипериммунизированных анатоксинами соответствующих типов, и выпускают в виде моновалентных сывороток, включающих по 1 ампуле сыворотки каждого типа, или в виде поливалентной сывсротки, содержащей в ампуле антитела ко всем 3 типам токсинов клостридий ботулизма.

За I ME противоботулинической сыворотки принимается то наименьшее количество ее, которое обладает способностью нейтрализовать 10000 Dim токсина для мышей весом 18-20г.

Одна лечебная доза антитоксина типа А- 10000 ME, типа В - 5000 ME и типа Е- 10000 ME. Антитоксины типов С и F в настоящее время не включаются в поливалентную сыворотку, так как заболевания, вызываемые возбудителями этих типов, встречаются редко.

При первых признаках заболевания больному вводят поливалентную сыворотку (внутримышечно или внутривенно).

После установления типа токсина назначается соответствующая моновалентная сыворотка.

С профилактической целью сыворотки вводят людям, употреблявшим продукты, вызвавшие отравление.

Антибактериальные и антивирусные сыворотки

Антибактериальные сыворотки получают гипериммуннзацией лошадей соответствующими убитыми бактериями или антигенами и содержат антитела с агглютинирующими, литическимн и опсонизирующими свойствами.

Они не нашли широкого применения в силу их малой эффективности.

Антибактериальные сыворотки относятся к нетитруемым препаратам, так как общепринятой единицы измерения их лечебной силы re существует. Поэтому антибактериальные лечебные сыворотки дозируются в объемных единицах, непосредственно у постели больного, исходя из степени тяжести заболевания.

Для очистки и концентрации антибактериальных сывороток и некоторых антивирусных используют метод, основанный на разделении белковых фракций нативных сывороток и выделении активных иммуноглобулинов этиловым спиртом при низкой температуре (метод водно-спиртового осаждения на холоду).

Среди антибактериальных сывороток (иммуноглобулинов) получили применение следующие препараты:

1. Противосибиреязвенный глобулин - содержит |3 и - глобулины, извлеченные из сывороток лошадей, гипериммунизированных сибиреязвенными бациллами. Применяются для профилактики людям, имевшим контакт с инфицированным материалом, и для лечения сразу после установления диагноза. Глобулин вводят внутримышечно.

2. Гамма-глобулин противолептоспирозный получают из сыворотки крови волов, гипериммунизированных патогенными для человека лептоспирами (L. icterohaemorrhaqia, L. qrippotyphosa, L. pomona, L. canicola, L. tarassovi).

Активность препарата определяется в реакции агглютинации, агглютинационный титр должен быть не ниже 1: 8000.

Гамма-глобулины применяются для лечения лептоспирозов. Препарат дозируется в объемных единицах в зависимости от тяжести заболевания и вводится внутримышечно. Перед введением гамма-глобулина необходимо проверить чувствительность больного к гетерогенному воловьему белку.

Антивирусные сыворотки также получают из сыворотки крови животных, иммунизированных вакцинными штаммами вирусов или соответствующими вирусами. Выпускают антивирусные сыворотки, очищенные методом спиртового фракционирования при низкой температуре.

Имеют применение следующие препараты:

1. Гамма-глобулин против клещевого энцефалита содержит гамма-глобулиновую и частично бета-глобулиновую (5-30%) фракции, извлеченные из сыворотки лошадей, гипериммунизированных вирусом клещевого энцефалита.

Гамма-глобулин применяют для лечения и профилактики клещевого энцефалита, омской геморрагической лихорадки и двухволнового менингоэнцефалита, вводят внутримышечно.

2. Антирабический гамма-глобулин (иммуноглобулин гетерогенный) извлекается из сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных вирусом fixe. Активность гаммаглобулина должна быть не ниже 800 МЕ/мл.

Более правильное название препаратов - «иммуноглобулины», но для многих выпускаемых сывороток еще сохранилось старое название «гам-ма-глобулины».

Иммуноглобулины (гомологичные)

Иммуноглобулины, получаемые из крови человека, готовят двух видов - противокоревой (или нормальный) и иммуноглобулины направленного действия. Преимущество этих иммуноглобулинов перед гетерогенными в том, что они практически нереактогенны и циркулируют в организме болеее продолжительное время, в течение 30-40 дней.

Извлекают иммуноглобулины из сыворотки крови человека путем фракционирования (по методу Кона) этиловым спиртом при температуре ниже нуля.

Противокоревой (или нормальный) иммуноглобулин получают из донорской, плацентарной или абортной крови. Содержит антитела против вируса кори, а также против вирусов гриппа, гепатита, полиомиелита, возбудителей коклюша и некоторых других вирусных и бактериальных инфекций.

Препарат применяют для профилактики кори, инфекционного гепатита, коклюша, полиомиелита, менингококковой инфекции и др.

Для профилактики кори иммуноглобулины вводят всем детям старше 3 месяцев, бывших в контакте с больным и не привитым коревой вакциной. Иммуноглобулины вводят с профилактической целью всем детям до 6 лет, контактировавшим с больным коклюшем и не привитым против этой инфекции.

Профилактика гепатита А иммуноглобулином проводится в предэпидемический период и в эпидемических очагах. Препарат в некоторых случаях оказывает защитное действие или чаще смягчает клиническое течение болезни. Очень важно правильное соблюдение дозировки иммуноглобулина (0,02 мл на 1 кг веса). Продолжительность профилактического действия препарата 3-6 месяцев.

Иммуноглобулины направленного действия готовят из сыворотки крови людей-добровольцев, подвергшихся специальной иммунизации против определенной инфекции. Такие препараты содержат повышенные концентрации специфических антител и используются для лечебных целей. В настоящее время получают иммуноглобулины направленного действия против гриппа, бешенства, оспы, клещевого энцефалита, столбняка и стафилококковых инфекций.

Противогриппозный гамма-глобулин готовят из сыворотки крови доноров, иммунизированных живой гриппозной вакциной типов А и В.

Применяется препарат для лечения, профилактики гриппа и вводится внутримышечно в определенных дозах в зависимости от возраста.

2. Антирабический гамма-глобулин (иммуноглобулин) извлекают из сыворотки людей, иммунизированных вакцинным штаммом вируса бешенства. Этот препарат вводится людям, укушенным бешенными животными, и которым нельзя вводить гетерогенный антирабический гамма-глобулин из-за высокой чувствительности к лошадиному белку. Применяется препарат также при лечении осложнений, вызванных антирабическими прививками.

3. Противооспенный донорский иммуноглобулин содержит гамма-глобулиновую фракцию крови доноров, специально ревакцинированных против оспы. Кровь для приготовления иммуноглобулина берут, начиная с 14-21-го дня после ревакцинации при максимальном содержании в ней вируснейтрализуюших антител (не ниже 1:4000).

Препарат применяется при лечении осложнений после прививок против оспы и для лечения заболевания.

4. Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный получают из сыворотки крови людей-доноров, ревакцинированных столбнячным анатоксином.

Противостолбнячный иммуноглобулин применяется для экстренной профилактики столбняка у непривитых детей и взрослых и, в случае необходимости, при лечении столбняка.

Препарат можно вводить отдельно или в сочетании с анатоксином. Показанием к экстренной профилактике столбняка являются травмы, ожоги и обморожения II и III степени и в ряде других случаев, связанных с нарушением целости слизистых, кожи.

Экстренная активно-пассивная профилактика столбняка при травмах введена в СССР с 1960 года.

5. Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый представляет собой гамма-глобулиновые фракции сыворотки крови людей-доноров (иммунизированных стафилококковым анатоксином) и из плацентарной крови.

В 1 мл препарата должно содержаться 50 ME донорского иммуноглобулина и 20 ME плацентарного иммуноглобулина.

Противостафилококковый иммуноглобулин применяется для лечения детей и взрослых различными стафилококковыми инфекциями, особенно при септическом течении заболеваний.

С этой же целью используется и антистафилококковая плазма, представляющая собой жидкую часть крови людейдобровольцев, иммунизированных стафилококковым анатоксином.

Противодифтерийная сыворотка являет собой эффективный противодифтерийный препарат, что получают из лошадинной крови (предварительно этих животных иммунизируют дифтерийным анатоксином). После выделения сыворотки путем ферментативного гидролиза ее очищают и концентрируют.

Состав

Как упоминалось выше, противодифтерийная сыворотка содержит (специфические иммуноглобулины), извлеченную из сыворотки лошадинной крови (животные предварительно гипериммунизированны дифтерийным анатоксином), концентрированную и очищенную с помощью солевого фракционирования и пептического переваривания.

Данное средство - прозрачная немного опалисцирующая желтоватая либо прозрачная жидкость, не имеющая осадка.

Кроме основного ингредиента, средство содержит 0.1% хлороформа в качестве консерванта.

Имунобиологические свойства

В 1 мл противодифтерийной сыворотки содержится не меньше 1500 МЕ (международная антитоксическая единица активности), что обезвреживают дифтерийный бактериальный токсин. Дозировка препарата зависит от формы заболевания, общего состояния пациента и его возраста.

Показания

Применение антитоксической противодифтерийной сыворотки оправдано и высокоэффективно при развитии разнообразных форм дифтерии у взрослых либо детей.

Формы выпуска

Концентрированная противодифтерийная сыворотка фасуется в ампулы по 10 мл, кроме этого в комплект входят ампулы объемом 1 мл, что применяются для внутрикожных проб (сыворотка в них разведена 1:100). В упаковку помещены 10 ампул.

Этикетка каждой ампулы снабжена следующими сведениями:

• количество МЕ;
• сроки годности;
• номера бутылки и серии;
• наименование препарата;
• название института и завода-изготовителя (и их место расположения);
• номер ОБК.

Те же сведения должны быть нанесены и на упаковку, кроме того, на ней должна быть информация о предприятии-изготовителе (полное название, адрес и министерство, его контролирующее), название средства на латыни, способы применения, а также условия хранения.

Хранят сыворотку в темном сухом месте при температуре 3-10 градусов. Препарат, который замораживался и впоследствии оттаивал, но не изменил физических свойств, считается пригодным.

В случае помутнения, образования осадка либо посторонних включений (волокна, хлопья), не разбивающихся при встряхивании, сыворотку использовать запрещено. Кроме того, использовать средство при отсутствии на нем этикетки либо при каких-либо повреждениях ампул, также нельзя.

Правила применения

Введение противодифтерийной сыворотки возможно как подкожно, так и внутримышечно в ягодицу (наружный верхний квадрант) либо в бедро (верхняя треть его передней поверхности).

Перед использованием ампулу с сывороткой следует тщательно проверить. Инъекция, как правило, проводится доктором, однако может и средним медперсоналом, но исключительно под контролем врача.

Введение противодифтерийной сыворотки по методу Безредко

Перед использованием сыворотки следует определить чувствительность пациента к лошадиному (гетерогенному) белку, что осуществляют при помощи внутрикожной пробы с сывороткой в разведении 1 к 100, что идет в комплекте с основным препаратом. Проводят данную пробу шприцем, что имеет деление 0.1 мл, и тонкой иглой. Причем для каждой такой пробы применяют индивидуальную иголку и отдельный шприц.

Выполняют пробу следующим образом: разведенную противодифтерийную сыворотку по методу Безредко (0.1 мл) вводят в предплечье (в его сгибательную поверхность) внутрикожно, после этого следят за реакцией на протяжении 20 минут. Отрицательной называют пробу, при которой диаметр возникающей папулы менее 0.9 см и есть легкая краснота вокруг нее. Положительной считают пробу, при которой папула больше 1 см и краснота вокруг нее значительная.

В случае отрицательной внутрикожной пробы под кожу вводят неразведенную сыворотку (0.1 мл), и при отсутствии реакции на нее на протяжении 30 (до 60) минут применяют всю требуемую терапевтическую дозу.

Если же в наличии разведенной сыворотки нет, то под кожу предплечья (в его сгибательную поверхность) вводится неразведенная сыворотка в количестве 0.1 мл и оценивается реакция на нее спустя 30 минут после укола.

Если реакции не последовало, под кожу вводят дополнительный объем сыворотки в количестве 0.2 мл и снова наблюдают, но уже 1-1.5 часа. В случае благополучного исхода (отсутствие реакции) вводят всю терапевтическую дозу противодифтерийной сыворотки.

Если внутрикожная проба положительная либо наблюдается возникновение сыворотка в качестве терапии применяется лишь в крайних случаях (наличие безусловных показаний), очень осторожно, при личном участии и контроле доктора. В этом случае используют разведенную сыворотку (что применяется для внутрикожных проб): вначале 0.5, затем 2, а после 5 мл (интервал между инъекциями - 20 минут).

Если положительная реакция не возникает, подкожно вводится неразведенная сыворотка в объеме 0.1 мл и за состоянием пациента наблюдают в течение получаса. Если и при этом реакция отсутствует, то осуществляют инъекцию в количестве всей требуемой терапевтической дозы.

В случае невозможности использования антидифтерийной сыворотки вследствие возникновения положительных реакций на какую-либо из вышеописанных доз, терапевтическую дозу сыворотки следует вводить под наркозом, предварительно подготовив шприцы с 5% "Эфедрином" либо "Адреналином" (1 к 1000).

В случае развития анафилактического шока вследствие введения сыворотки от дифтерии, требуется срочная адекватная терапия: применение эфедрина либо адреналина, аналептиков, глюкокортикостероидов, сердечных гликозидов, хлорида кальция, новокаина.

Применение сыворотки

Действенность сыворотки от дифтерии напрямую зависит от правильно подобранной первой, а также курсовой дозировки и как можно более раннего применения данного средства после подтверждения диагноза.

• В случае островчатой локализованной дифтерии зева (ротового отрезка глотки) первичная дозировка составляет 10-15 тыс. МЕ, а курсовая - 10-20 тыс. МЕ.
• В случае пленчатой формы: от 15 до 30 тыс. (первая доза), а курсовая - до 40 тыс. МЕ.
• При распространенной дифтерии зева 1-я доза сыворотки составляет 30-40 тыс. МЕ, а курсовая, соответственно, 50-60 тыс. МЕ.
• В случае субтоксической формы, развившейся в ротовом отрезке глотки, дозировка составляет 40-50 тыс., а курсовая - 60-80 тыс. МЕ.

Противодифтерийная сыворотка: алгоритм введения при токсической форме патологии

• 1 степень - начальная дозировка 50-70 тыс. МЕ, курсовая 80-120 тыс. МЕ;
• 2 степень - начальная дозировка 60-80 тыс. МЕ, курсовая 150-200 тыс. МЕ;
• 3 степень - начальная (первая) доза 100-200 тыс. МЕ, курсовая 250-350 тыс. МЕ.

При токсической форме применять сыворотку следует каждые 12 часов на протяжении 2-3 дней, а затем дозу и кратность введения корректируют в соответствии с динамикой болезни. Причем в первые несколько суток пациенту вводят 2/3 курсовой дозировки.

• В случае гипертоксической дифтерии ротового отрезка глотки назначаются максимальные дозировки препарата. Так, 1 доза составляет 100-150 тыс. МЕ, а курсовая - не больше 450 тыс. МЕ.
• В случаях локализованного крупа: 1 доза - 30-40 тыс. МЕ, а курсовая 60-80 тыс. МЕ.
• В случаях дифтерии, локализованной в носовом отрезке глотки, дозы составляют 15-20 тыс. и 20-40 тыс. МЕ (первая и курсовая дозировки соответственно).

Терапия дифтерии локализованной

• При поражении глаз. Первичная дозировка 10-15 тыс. МЕ, курсовая - 15-30 тыс. МЕ.
• Поражения дифтерией половых органов - 10-15 тыс. МЕ, курсовая - 15-30 тыс МЕ.
• Поражения кожи: первичная доза - 10 тыс. МЕ, курсовая - 10 тыс. МЕ.
• Поражения носа: первая доза 10-15 тыс. МЕ, а курсовая - 20-30 тыс. МЕ.
• Поражения пупка: первичная доза - 10 тыс. МЕ, а курсовая - также 10 тыс. МЕ.

Количество инъекций с противодифтерийной сывороткой назначается в зависимости от клиничекой формы патологии. Например, однократное введение назначается пациентам, что имеют локализованную либо распространенную формы дифтерии ротового отдела глотки либо носа.

Если исчезновение налета не происходит на протяжении суток после назначения сыворотки, то спустя 24 часа препарат применяется повторно.

Отмену сыворотки производят после значительного улучшения в состоянии пациента (исчезновение отека шейной клетчатки, глотки (ее ротовой части), налета и уменьшение интоксикации).

Побочные явления

Могут быть:

• немедленные (появляются сразу после применения сыворотки);
• ранние (спустя 4-6 дней после применения препарата);
• отдаленные (спустя две и более недель после инъекции).

Возможно возникновение следующих побочных эффектов: гипертермии (повышенная температура), кожная сыпь, озноб, нарушения в функционировании сердечно-сосудистой системы, судороги и так далее. Продолжаются подобные явления не более нескольких дней. Редко возможно развитие коллапса. В случае повления подобных неблагоприятных эффектов необходимо назначение своевременной адекватной симптоматической терапии.

Различают антитоксические и антибактериальные сыворотки. Антитоксические сыворотки содержат специфические антитела - антитоксины, нейтрализующие токсины возбудителей. Антитоксическими сыворотками являются противодифтерийная, противостолбнячная, противогангренозная, противосибиреязвенная и др. Антибактериальные сыворотки содержат антитела против бактерий. Их готовят из крови людей или животных. Сыворотки, изготовленные из крови людей, циркулируют в организме до 12 месяцев и не вызывают побочных реакций. Сыворотки, изготовленные из крови животных, действуют в течение 12 недель и могут вызвать нежелательные побочные эффекты. Их можно применять после предварительной десенсибилизации организма, осуществляемой путем последовательного подкожного (с интервалом в 3060 мин) введения небольших порций сыворотки, после которого внутримышечно применяется вся доза лечебной сыворотки.

При положительной пробе сыворотки вводятся под наркозом или под прикрытием больших доз глюкокортикоидов. Это позволяет в случае развития осложнений (анафилактического шока) немедленно начинать неотложную помощь. Принцип использования при лечении сывороток и иммуноглобулинов - это как можно раннее их применение, пока возбудитель и его токсины не проникли в органы и ткани организма человека, где они недоступны антителам, и до возникновения осложнений. При ряде инфекций (полиомиелит, эпидемический паротит и др.) можно использовать нормальный человеческий иммуноглобулин, производимый из плацентарной, абортной и венозной крови людей. При использовании сывороток и гаммаглобулинов возможны осложнения. Анафилактический шок может развиться после введения препарата через несколько секунд, сывороточная болезнь - через 712 суток.

Эфферентная терапия (от лат. efferens - выводить) направлена на выведение из организма больного возбудителей и их токсинов. Основными ее методами являются гемодиализ, гемосорбция, плазмаферез, плазмосорбция, лимфосорбция и др. Воздействие на реактивность микроорганизма. Воздействие на реактивность микроорганизма осуществляется рациональным применением лечебных вакцин, средств активной и пассивной и других, повышающих реактивность организма, препаратов и методов лечения. Вакцинотерапия (специфическая активная иммунизация) заключается в том, что для повышения иммуногенеза больным вводят специфические антигены, которые имеются в микробах.

Используются аллергены (бруцеллин, токсоплазмин), обладающие десенсибилизирующим и иммунизирующим действием, а также анатоксины. В некоторых случаях применяются вакцины, изготовленные из штамма возбудителя, выделенного от больного (аутовакцина). Живые вакцины для лечебных целей, как правило, не употребляют. Вакцинотерапия показана при ряде хронических заболеваний (хроническая дизентерия, бруцеллез, токсоплазмоз), при затянувшемся процессе выздоровления (туляремия), а также для предупреждения рецидивов (брюшной тиф, паратифы). Длительность курса вакцинотерапии чаще всего равняется 814 дням. Чаще всего вакцину вводят внутрикожное, постепенно, раз от раза увеличивая ее дозу. Одновременно с вакциной целесообразно давать инфекционному больному достаточное количество витаминов и проводить общее ультрафиолетовое облучение.
Неспецифическая иммунотерапия возможна в пассивном и активном вариантах.

Неспецифическая, пассивная иммунотерапия используется в остром периоде тяжелых инфекционных заболеваний, когда против патогенных возбудителей нет иммунных сывороток. Наиболее доступной является трансфузия свежей донорской крови, но используется она только по жизненным показаниям из-за угрозы заражения вирусными гепатитами и ВИЧ инфекцией. Неспецифическая, активная иммунотерапия позволяет повышать реактивность организма. Применяется только в период ремиссии или в случае затяжного или хронического течения инфекционного заболевания. Для этих целей используются бактериальные пирогены (пирогенал и др.), биологические (тималин, тимоген, интерфероны и др.), химические (декарис и др.) препараты, повышающие активность иммунной системы человека. Глюкокортикоиды (преднизолон, гидрокортизон, дексаметазон и др.) нашли широкое применение в лечении инфекционных болезней. Они обладают выраженными противовоспалительными и десенсибилизирующими свойствами.

Их необходимо применять при выраженной воспалительной и аллергической реакции (при анафилактическом шоке, инфекционно-токсическом шоке, отеке - набухании головного мозга, острой печеночной и почечной недостаточности). Однако при длительном применении больших доз гормонов подавляются иммунные процессы, и снижается резистентность организма к различным инфекционным агентам, что может привести к обострению хронических инфекций и более тяжелому течению инфекционного заболевания. Кроме того, возможно образование «стероидных» язв. Поэтому гормоны используются строго по показаниям с применением мер по нейтрализации побочных реакций (одновременное введение антибиотиков, введение солей калия и пр.). В терапии инфекционных болезней важны антиоксидантные средства (витамины С и Е, унитиол, препараты янтарной кислоты и др.), ферментные средства и др.

Важным немедикаментозным методом лечения является оксигенотерапия, при которой компенсируется гипоксия, подавляется патогенная флор (анаэробная). Оксигенотерапия используется при лечении вирусных гепатитов, брюшного тифа, ботулизма и других инфекционных болезней. Фототерапия в виде ультрафиолетового или лазерного облучения крови с успехом применяется при лечении ряда инфекционных болезней (пневмонии, синуситы и др.). Большое значение в комплексной терапии инфекционных больных имеет режим двигательной активности, полноценное диетическое питание, витаминизация, лечебная физкультура и физиопроцедуры.

Антитоксические сыворотки и технология их приготовления

Чаще всего антитоксические сыворотки готовят с целью диагностики клостридиозов: злокачественного отека, инфекционной энтеротоксемии, ботулизма и других заболеваний, возбудители которых образуют сильные экзотоксины и имеют множество серологических типов. В качестве антигенов при получении таких сывороток используют анатоксины.

Технологическим примером получения таких сывороток является изготовление антитоксических сывороток Cl. perfringens типов А, В, С, D, Е и F.

В качестве продуцентов таких диагностических сывороток чаще используют валухов тонкорунных пород в возрасте двух лет. Антигенами являются очищенные и концентрированные анатоксины, полученные с помощью соответствующих типов Cl. perfringens. Для каждого типа указанного микроба используют отдельных продуцентов, которых содержат в отдельных боксах. Антигены овцам вводят подкожно в возрастающих дозах с принятым интервалом 4--6 суток между инъекциями. Гипериммунизацию животных прекращают после получения сывороток с активностью, предусмотренной инструкцией по ее изготовлению. Поэтому в процессе эксплуатации у продуцентов берут кровь и в ее сыворотке определяют титры антитоксинов. Активность каждого типа антитоксических сывороток, устанавливают в реакции нейтрализации специфических токсинов при введении их смесей белым мышам или крысам и выражают ее количеством антитоксических единиц.

Получение антитоксических сывороток для диагностики других инфекционных заболеваний осуществляют по такой же схеме. Но в качестве продуцентов могут использоваться другие животные. Разумеется, что в схеме гипериммунизации животных в каждом случае имеются свои особенности.

Диагностические сыворотки для постановки реакции связывания комплемента и технология их приготовления

При ряде инфекционных заболеваний образуются так называемые комплементсвязывающие антитела. При их определении в практике используются специфические диагностические сыворотки, содержащие такие антитела. Показательным примером является приготовление специфических диагностических ящурных сывороток. Дело в том, что вирус ящура обладает высоким плюрализмом. Ом вызывается одним из вариантов вируса ящура. Идентификацию штамма циркулирующего вируса ящура проводят с помощью реакции связывания комплемента (РСК). Специфическую типовую и вариантную сыворотки получают от морских свинок, которых заражают вирусосодержащей суспензией соответствующего типа, с добавлением к ней сапонина и спустя 30--40 суток дополнительно гипериммунизируют тем же материалом путем двух-четырех внутримышечных инъекций. Через 7--10 суток после последней инъекции морских свинок обескровливают и из крови готовят инактивированную сыворотку. Сыворотку проверяют в РСК на активность и специфичность. В качестве антигена для изготовления сывороток используют штаммы вируса ящура, адаптированные к организму новорожденных крольчат или к культурам клеток.

Следует иметь в виду, что при постановке РСК пробирочным способом для учета ее обычно используют гемолитическую (индикаторную) систему, в которой в качестве специфической используется гемолитическая сыворотка (гемолизин). Получается она на биопредприятии путем гипериммунизации кроликов эритроцитами баранов (валухов). Достижение титров гемолизина 1:6000 и выше дает основания к прекращению гипериммунизации кроликов. Через 7--10 суток после последней инъекции кроликам эритроцитов барана их обескровливают, получают сыворотку и консервируют ее фенолом.

При постановке РСК непременным условием является применение в качестве одного из ее компонентов комплемента. Комплемент-- это неспецифический фактор гуморального иммунитета, содержащийся в сыворотках крови теплокровных и холоднокровных животных. Наиболее изучен комплемент морской свинки. Поэтому при постановке РСК в качестве комплемента используют сыворотку крови морских свинок. Для его получения морских свинок выращивают в специальных питомниках. При этом нормы кормления, содержания животных должны соответствовать зооветеринарным требованиям. От здоровых животных, достигших массы 300--350 г, тотально из сердца берут кровь, собирают ее в емкости и отстаивают сыворотку, которую консервируют фенолом, в необходимых случаях высушивают лиофильным способом и после биологического контроля рассылают в диагностические лаборатории.

Следует заметить, что комплемент действует подобно ферменту на комплекс антиген -- антитело, то есть на антигены, уже связанные специфическими антителами. Основная функция комплемента литическая (растворяющая, разрушающая антиген). Нелитические свойства у комплемента проявляются при воздействии его на систему антиген -- антитело, где антиген является растворимым белком или вирусом. В данном случае имеет место лишь укрупнение иммунного комплекса. Это происходит в реакции конглютинации (РК), в которой используют нелитические или слаболитические комплементы лошади, свиньи; но не морской свинки.

61. Иммунные сыворотки, к лассификация.Получение,очистка, применение. Антитоксические сыворотки, получение, очистка, титрование, применение. Осложнения при использовании и их предупреждение. Понятие об иммуномодуляторах

К настоящему времени разработаны и применяются не только антитоксические сыворотки для ле¬чения и профилактики дифтерии, столбняка, газовой гангрены, ботулизма, но и множество противобактериальных (противотифозная, дизентерийная, противочумная и др.), а так¬же противовирусных сывороток (гриппозная, коревая, против бешенства и др.).

Иммунные сыворотки получают путем гипериммунизации (т. е. многократной интенсив¬ной иммунизации) животных (чаще всего ло¬шади, ослы, иногда кролики) специфическим антигеном (анатоксином, бактериальными или вирусными культурами и их антигенами) с пос¬ледующим, в период максимального антитело-образования, кровопусканием и выделением из крови иммунной сыворотки. Иммунные сыворотки, полученные от животных, называют гетерогенными, так как они содержат чужерод¬ные для человека сывороточные белки.

Для получения гомологичных нечужеродных иммунных сывороток используют сыворотки переболевших людей (коревая, паротитная, оспенная сыворотки) или специально иммунизированных людей-доноров (противостолбнячная, противоботулини-ческая и другие сыворотки) либо СЫВОРОТКИ из плацентарной, а также абортной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакци¬нации или перенесенного заболевания.

Естественно, что гомологичные сыворотки предпочтительнее гетерологичных.

Поскольку нативные иммунные сыворотки содержат в своем составе ненужные балластные белки, например альбумин, из этих сывороток выделяют и подвергают очистке и концентрированию специфические белки - иммуноглобулины.

Для очистки и концентрирования иммуног-лобулинов используют различные физико-химические методы: осаждение спиртом или ацетоном на холоде, обработка ферментами, аффинная хроматография, ультрафильтрация.

Титрование антитоксических сывороток может производиться тремя методами: по Району, Эрлиху и Ремеру:

Метод Района . Осуществляется с помощью реакции флоккуляции по известному анатоксину или токсину, одну Lf которых нейтратизует одна единица антитоксина. Первичная, или инициальная, реакция флоккуляции наступает при соответствии количества антигенных единиц анатоксина количеству антитоксинов в исследуемой сыворотке. Исходя Из результатов первичной реакций флоккуляции и ведут расчет антитоксических единиц в 1 мл испытуемой сыворотки. Однако метод Района является только ориентировочным.

Метод Эрлиха . Перед титрованием сывороток определяют условную смертельную (опытную) дозу токсина. За опытную дозу токсина (Lt ) принимается то его количество, которое в смеси с 1 ME стандартной сыворотки вызывает гибель 50% взятых в опыт животных. На втором этапе титрования к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина, смесь выдерживают 45 мин и вводят животным. По получаемым результатам производят раечет титра испытуемой антитоксической сыворотки.

Метод Ремера . Титрование также осуществляется в два этапа, но данный метод является более экономичным, так как опыт проводится на одном животном. Предварительно определяется опытная некротическая доза токсина - Ln (Limes necrosis ) введением внутрикожно морской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой. За некротическую дозу токсина принимается то его наименьшее количество, которое при внутрикожном введении морской свинке в смеси с 1/50 ME стандартной антитоксической сыворотки вызывает на месте введения некроз на 4-5-й день. Затем различные объемы испытуемой сыворотки в смеси с оттитро ванной некротической дозой токсина вводят внутрикожно морской свинке и по результатам производят расчет титра сыворотки. По методу Ремера титруется противодифтерийная сыворотка.

Иногда, а именно для повышения специ-фичности и активности антител, из молеку¬лы иммуноглобулина выделяют только анти-генсвязывающий участок (Fab-фрагменты); такие иммуноглобулины получили название доменных антител.

Активность иммунных сывороток и имму-ноглобулинов выражают в антитоксических единицах, в титрах вируснейтрализующей, гемагглютинирующей, преципитирующей, агглютинирующей и т. д. активности, т. е. тем наименьшим количеством антител, которое вызывает видимую или регистрируемую соот-ветствующим способом реакцию с определен¬ным количеством специфического антигена.

Иммунные сыворотки и иммуноглобулины применяют с лечебной и профилактической целью. Особенно эффективно применение сывороточных препаратов для лечения токси-немических инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена), а также для ле¬чения бактериальных и вирусных инфекций (корь, краснуха, чума, сибирская язва и др.) в комплексе с другими способами лечения. С лечебной целью сывороточные препараты

Иммунопрофилактика и иммунотерапия вводят как можно раньше внутримышечно (иногда внутривенно) в больших дозах.

Профилактические дозы сывороточных пре-паратов значительно меньше лечебных, а пре-параты вводят внутримышечно обычно лицам, имевшим контакт с больным или иным ис-точником инфекции, для создания пассивного иммунитета. При введении сывороточных пре-паратов иммунитет наступает через несколько часов и сохраняется 2-3 недели после введения гетерологичных в течение 4-5 недель - гомо-логичных сывороточных препаратов.

После введения сывороточных^ препара¬тов возможны осложнения в виде анафи¬лактического шока и сывороточной болезни. Поэтому перед введением препаратов ставят аллергическую пробу на чувствительность к ним пациента, а вводят их по Безредке.

Вещества, оказывающие влияние на фун¬кцию иммунной системы, называют иммуномодуляторами .

Их принято подразделять на экзогенные и эндогенные.

К экзогенным иммуномодуляторам относится большая группа веществ различной химической природы и происхождения, оказывающих неспецифическое активирующее или супрессивное действие на иммунную систему, но являющихся чужеродными для организма.

Эндогенные иммуномодуляторы представля¬ют собой достаточно большую группу олиго-пептидов, синтезируемых самим организмом, его иммунокомпетентными и другими клетка¬ми, и способных активировать иммунную сис¬тему путем усиления пролиферации и функции иммунокомпетентных акцессорных клеток.

К экзогенным иммуномодуляторам можно отнести разнообразные адъюванты, природ¬ные или полученные синтезом химические вещества, физические воздействия (радиация, климатические факторы), а к эндогенным им¬муномодуляторам - регуляторные пептиды: интерлейкины (ИЛ-1-ИЛ-26), интерфероны (а-, у-), миелопептиды (5 пептидов), пепти¬ды тимуса (тактивин, тимозин, тимопоэтин и др.), хемокины, ФНО, КСФ, ТФР. Как те, так и другие иммуномодуляторы могут оказывать на иммунную систему активирующее или супрес¬сивное действие, которые могут быть специ¬фическими и неспецифическими, направлен-ными на активацию и подавление отдельных звеньев в работе иммунной системы.

Иммуномодуляторы нашли широкое при-менение при первичных и вторичных имму-нодефицитах различного происхождения, при онкологических болезнях, при транспланта-ции органов и тканей, при лечении иммуно-патологических и аллергических болезней, в иммунопрофилактике и лечении инфек¬ционных болезней и т. д. Для этого создано множество препаратов, обладающих иммуномодулирующим действием.