Получение и обработка материала для цитологического исследования. Приготовление мазков и их фиксация Где сделать мазок отпечаток кожи на стекле

• Библиотека • Дерматология • Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований

Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований

Мазки-отпечатки - это метод цитологического исследования, применяемый с диагностической целью. Особенно ценным этот метод может оказаться при диагностике пузырчатки, злокачественных новообразований.

Мазки-отпечатки берут со дна эрозий, язв или свежих пузырей после удаления покрышки. При наличии фибринозного налета или корок на поверхности язв и эрозий, последние удаляют тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой.

На очищенную эрозивно-язвенную поверхность легко прижимают кусочек стерильной резинки, на котором остаются клеточные элементы, в том числе дегенерирующие, эпителиальные и аконтолитические клетки. Материал на кусочке резинки переносят на обезжиренное предметное стекло (по 4-6 отпечатков на каждые 3-4 стекла), фиксируют метиловым спиртом и высушивают при комнатной температуре. Окраска производится по методу Романовского-Гимзы. Препарат исследуется под микроскопом - сначала с малым увеличением, а затем под иммерсией.

Ред. проф. В.С. Маята

«Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований» – раздел

Автор (ы): Ян Рыбничек, MVDr, Diplomate European College of Veterinary Dermatology
Организация(и): Dermatology and Dermatopathology Service, Czech Republic
Журнал: №2 - 2013

Большинство болезней кожи имеют сходную клиническую картину, однако можно выделить девять основных групп характерных дерматологических нарушений:

– алопеция

– образование чешуек/корок/себорея

– макулы/папулы/вскрывающиеся пустулы

– узлы/опухоли

– изменения пигментации

Как только врач-клиницист начнет относить каждого пациента к какой-либо из перечисленных выше категорий, ему станет намного проще формировать список дифференциальных диагнозов и разрабатывать диагностический план. Необходимо помнить, что у пациента могут быть сопутствующие болезни в настоящий момент времени, которые затрудняют постановку основного диагноза.

Быстрая постановка диагноза часто представляет значительные трудности для практикующего врача, поэтому далее речь пойдёт о доступных методах лабораторного исследования, требующих минимальных затрат времени и средств. Наиболее простые и быстрые диагностические тесты, используемые на практике:

– Соскобы кожи

– Трихоскопия

– Вычёсывание гребнем или щёткой

– Скотч-тест

– Исследование на дерматофиты

– Цитология кожи

Кожные соскобы

Данное исследование должно проводиться во всех случаях! Для проведения кожных соскобов необходимо следующее оборудование и материалы: минеральное масло, предметные стёкла, лезвие скальпеля или шпатель (кюретка), микроскоп.

Исследование в лучах лампы Вуда – крайне неспецифично, однако при выявлении флюоресценции, пораженные волоски выщипываются и подвергаются дальнейшему исследованию (микроскопии после обработки препарата раствором щёлочи, посев для выявления культуры дерматофитов). На предметное стекло наносят 10% раствор КОН, размещают удалённую шерсть, нагревают над пламенем, проводят микроскопию, предварительно накрыв покровным стеклом, сначала под малым увеличением (объектив 10х), затем под большим (объектив 40х). Для лучшей визуализации можно использовать окраску хлорлактофенолом.

Скотч-тест

Для получения материала для цитологии необходимо коротко подстричь шерсть с выбранного участка, плотно прижать полоску скотча, затем её поочерёдно опускают в растворы красителей, приклеивают на предметное стекло и проводят микроскопию. Этим методом легко выявляются дрожжевые грибы рода Malassezia в форме «матрёшки», бактерии рода Simonsiella (свидетельствует о попадании слюны при вылизывании) и др.

Трихоскопия

При микроскопии обращают внимание на структуру и пигментацию стержней волос, осматривают кончики волос, оценивают трихограмму (соотношение волос в разных фазах цикла фолликула: анаген/телоген). Анаген – стадия роста, корень удалённого волоса мягкий, приобретают округлую форму («ручки от зонта»). Катаген – промежуточная стадия, рост волоса прекращается, корень имеет форму кисти, окруженной стекловидной оболочкой. Телоген – стадия покоя волосяного фолликула, корень волоса теряет пигмент, сужается к концу в форме «художественной кисти», приобретает вид «копья». Различают первичные и вторичные волосы (в норме). Утрата первичных волос может быть одним из диагностических критериев при некоторых алопециях (например, при алопеции Х). Стержни первичных волос большего диаметра, мозговое вещество всегда толще коркового. Вторичные волосы меньшего диаметра, часто волнистые, мозговое вещество тоньше коркового.

Строгих норм для трихограммы не существует, однако есть наблюдения, описывающие соотношение анаген/телоген 1:9 зимой и 1:1 летом у некоторых собак. Существуют породные особенности - у собак с постоянно отрастающей шерстью (например, пудели) преобладают фолликулы в стадии анагена независимо от времени года, а у собак северных пород может наблюдаться выраженная телогенизация луковиц.

Наличие всех 100% волос в стадии телогена в большинстве случаев не является нормой, может быть обусловлено неправильным взятием пробы, гормональными нарушениями, алопецией Х, телогеновой алопецией. Гормональные факторы оказывают влияние на цикл волосяного фолликула и сопровождаются телогенизацией, из-за задержки в цикле волосяного фолликула волосы постепенно подвергаются процессу старения (чёрная шерсть приобретает красноватый оттенок, рыжая – обесцвечивается, кончики могут расщепляться). Первичный волос исчезает, задержавшийся подшерсток имеет вид щенячьей шерсти. Эндокринными причинами таких алопеций могут быть гипотиреоз, гиперэстрогенизм, гиперкортицизм. Неэндокринной причиной является синхронизация всех волос в телогене, вызванная тяжёлой болезнью или стрессом. Как только волос возобновляет свой рост, через 1-2 месяца наступает ремиссия. Алопеция Х является болезнью с невыясненной до конца этиологией.

Структурные нарушения корней волос возникают вследствие фолликулярной дистрофии или дисплазии. В редких случаях это может быть связано с повреждением гранулами пигмента. Также корни волос повреждаются при очаговой алопеции и воздействии цитотоксических лекарств (редко).

Обращают внимание на кончики волос: в норме они имеют заострённую форму, а при алопеции вследствие вылизывания наблюдаются признаки травматизации кончиков волос (они могут быть обломанными). Кончики волос могут повреждаться из-за повышенной хрупкости, вызванной структурными изменениями. Например, отмечено появление раздвоенных кончиков волос при трихофитозе у гольден-ретриверов. Патологические изменения кончиков волос могут быть следствием чрезвычайно агрессивного мытья и расчёсывания шерсти, а также механического повреждения в местах повышенного трения.

При оценке стержня волоса можно обнаружить споры дерматофитов. При правильном выполнении трихоскопия даёт положительный результат в 60-70% случаев дерматофитоза. Предпочтительнее исследовать волосы, флюоресцирующие в лучах лампы Вуда. Структура стержня волоса нарушается не только при дерматофитозе, но и в ряде других случаев, например, химиотерапии (редко), механической и химической травме (агрессивный уход), недостатке питательных веществ, наследственных болезнях (узловой трихорексис и др.). Характерные изменения структуры стержня волоса наблюдаются при медуллярной трихомаляции немецких овчарок, проявляющейся у взрослых собак. Шерсть выглядит подстриженной на теле, хвосте, плече-лопаточной области. При трихоскопии в стержнях волос наблюдаются продольные трещины, разрывы. Характерные изменения отмечаются при алопециях, связанных с нарушением продукции меланина – алопеции «ослабленного» окраса и фолликулярной дисплазии чёрных волос. «Обесцвечивающей алопеции» подвержены собаки с голубым и светло-коричневым окрасами. При данной болезни в волосе с ослабленным цветом обнаруживаются крупные гранулы пигмента, которые вызывают повышенную ломкость волоса, что приводит к алопеции. Фолликулярная дисплазия чёрных волос наблюдается у двух- и трёхцветных собак, при этом поражаются только фолликулы чёрных волос. Щенки рождаются нормальными, но впоследствии зоны тёмных волос постепенно подвергаются алопеции. При трихоскопии выявляются аномальные глыбки меланина в стержне волоса.

При трихоскопии можно легко обнаружить агрегаты кератина в виде слепков волосяных фолликулов на стержне волос. Они возникают вследствие дефектов кератинизации (первичная себорея кокер-спаниелей, дерматоз при недостатке витамина А, аденит сальных желёз, лейшманиоз, демодекоз), а также при других фолликулярных болезнях, например, бактериальном фолликулите.

Цитология кожи

Цитология кожи – быстрый, неинвазивный метод, имеющий большую диагностическую ценность. Данный вид исследования особенно ценен для диагностики нодулярных, экссудативных, гнойничковых поражений, при образовании корок и себорее, а также при отитах. При нодулярных поражениях предпочтительнее получение материала путём тонкоигольной аспирации при помощи шприца объёмом 10 мл с иглами 21G, 24G. При мокнущих поражениях можно проводить исследование мазков-отпечатков. Также цитологическому исследованию подвергают скотч-препараты, и, конечно, глубокие соскобы. Препараты высушивают на воздухе, можно использовать фиксацию метанолом. Я использую модифицированный краситель Райта (Diff-Qick), в лабораториях также проводят окраску специальными красителями, иммуноцитохимию. Просмотр препаратов проводят последовательно с использованием объективов 4х, 10х, 40х, 100х (с иммерсионным маслом).

В соскобе с нормальной кожи преобладают корнеоциты, присутствуют также другие кератиноциты, единичные фибробласты. При цитологическом исследовании материала с воспалённых участков обращают внимание на следующие клетки:

– Нейтрофилы (дегенеративные и недегенеративные);

– Макрофаги;

– Лимфоциты/плазматические клетки;

– Эозинофилы и тучные клетки;

– Акантолитические клетки (округлённые кератиноциты, лишённые отростков);

– Неопластические клетки.

Также можно обнаружить микроорганизмы (палочки, кокки, малассезию, другие грибы, лейшмании и др.).

Я использую следующие основные критерии цитологической дифференциальной диагностики:

– Бактерии и эпителиальные клетки – бактериальный перерост;

– Дегенеративные нейтрофилы и бактерии – пиодермия;

– Недегенеративные нейтрофилы в большом количестве + акантолитические клетки – листовидная пузырчатка, эритематозная пузырчатка и др. (дополнительно + гистопатология);

– Нейтрофилы + макрофаги – пиогранулёма/гранулёма (грибковая, атипичная бактериальная инфекция);

– Лимфоциты, плазматические клетки – хроническое воспаление, плазмацитарный пододерматит, лимфома (дополнительно + лимфобласты);

– Malassezia sp. и эпителиальные клетки – малассезиозный дерматит.

При оценке морфологии клеток принято оценивать следующие признаки злокачественности:

– Цитоплазматические критерии (анизоцитоз, макроцитоз, разная интенсивность окраски (степень базофилии), атипичные включения /вакуолизация, отсутствие специфичных гранул, большое ядерно-цитоплазматическое соотношение, а также наличие в препарате клеток, значительно различающихся по этому параметру);

– Ядерные критерии (анизокариоз, макрокариоз, изменение формы ядер, разреженный хроматин или гиперхромазия, анизохромазия, высокий митотический индекс, неправильные митозы, множественные ядрышки, гигантские ядрышки, патологическая форма ядрышек).

При исследовании цитологических препаратов нодулярных поражений надо ответить на следующие вопросы:

– Воспаление/опухоль;

– Неоплазия – доброкачественная/злокачественная;

– Источник неоплазии;

– Происхождение ткани: эпителиальные, мезенхимальные, гемопоэтические (круглоклеточные) опухоли.

Наиболее частыми цитологическими дифференциальными диагнозами опухолевых поражений кожи в практике являются:

– Эпителиальные опухоли (кератоакантома, плоскоклеточный рак и другие);

– Мезенхимальные опухоли (фибросаркома, меланома и др.);

– Круглоклеточные опухоли (мастоцитома, гистиоцитома, лимфома);

В связи с ростом доступности гистопатологии в последние годы значительно выросла возможность диагностики различных дерматологических патологий. Несмотря на это, пока достаточно редко прибегают к взятию гистобиоптатов ввиду возможности получения малоинформативных результатов. Поэтому дальнейшая информация посвящается оценке необходимости взятия гистобиопсии кожи, правильному выбору участка кожи для гистологического исследования, корректному забору образца, выбору патогистолога и интерпретации гистологического заключения. Только при соблюдении всех этих условий, можно получить точный диагноз.

1) Гистобиопсия обычно не применяется для диагностики у собак с хроническим зудом. В большинстве случаев, результаты биопсии не дадут той информации, которую может получить специалист-дерматолог при клиническом обследовании.

2) Гистобиопсия кожи может быть полезна в следующих случаях:

– Алопеция, когда не удается поставить диагноз с использованием «быстрых» методов диагностики (т.е трихоскопии, кожных соскобов, цитологии…)

– Шелушение, когда не удается поставить диагноз с использованием «быстрых» тестов

– Пятна, папулы, вскрывающиеся пустулы, когда не удается поставить диагноз с использованием «быстрых» тестов

– Незаживающие эрозии, язвы, свищи

– Длительно существующие узлы, уплотнения, опухоли

– Депигментация и необычная гиперпигментация

– Подозрение на аутоиммунные болезни

– Подозрение на болезни кожи, при которых подтверждение диагноза возможно только гистологически (например, аденит сальных желёз)

– Случаи, когда подозревается опасный для жизни диагноз (дерматомиозит и др.)

– Случаи, когда отсутствует ответ на вполне рациональное лечение

Как получить качественные гистобиоптаты кожи

Чтобы получить понятный правильный гистологический диагноз, следует выполнять следующие действия:

1) Выбор участка для биопсии

Необходимо представить патологу соответствующие образцы, поэтому клиницист должен уделить внимание выбору нужного участка кожи. В большинстве случаев, для более вероятного получения правильного диагноза необходимо взять как минимум 3-5 образцов кожи от одного пациента. Выбор места для биопсии зависит от типа обнаруженных поражений:

– Алопеция: биоптаты должны быть получены с участка полностью облысевшей кожи (желательно 2), на границе нормальной кожи и области алопеции (1) и с кожи, покрытой нормальной шерстью (если такой имеется), чтобы патолог мог сопоставить физиологические волосяные фолликулы и фолликулы из области патологического процесса данного пациента.

– Шелушащиеся поражения («себорейная» кожа): берётся 2-3 биоптата с поражённого участка и образец нормальной кожи (1), чтобы была возможность сравнить эпидермис, особенно роговой слой в этих участках. Можно использовать биопсийную иглу для получения образцов.

– Макулы, папулы, пустулы: в результате биопсии должны быть получены образцы как минимум с трёх участков первичных поражений, которые должны располагаться в центре биоптата. Можно использовать биопсийную иглу для получения образцов.

– Изъязвлённые участки: это наиболее сложный для биопсии тип поражений. Основной ошибкой является направление патологу биоптата из центра язвы с последующим получением ответа «язва» без какого-либо специфического диагноза. В ситуации, когда материал получен из центра большой язвы, гистологическая картина будет характерна для инфекционного процесса. Приходится также брать несколько образцов, чтобы патолог мог связать процессы, происходящие в язве, и в нормальной коже. Если присутствуют небольшие язвы, можно отправить на исследование всю эту зону целиком, включая ободок здоровой ткани.

– Свищи: обычно патологический процесс расположен глубоко в дерме, а зачастую и под кожей, поэтому нужна очень глубокая биопсия для выяснения природы патологического процесса. В таких случаях лезвием скальпеля проводят иссечение клиновидного биоптата, с помощью биопсийной иглы при таком типе поражений невозможно получить информативный образец. В то же время, имеет смысл биопсийный материал направить на бактериологическое, микологическое исследование.

– Уплотнения и узлы: опять хирургическая эксцизия всего узла с прилегающими нормальными тканями является методом выбора. Согласно установленным правилам, эта процедура может проводиться только после исключения мастоцитомы путем проведения тонкоигольной аспирации и цитологического исследования.

– Депигментация: гистобиоптаты получают с полностью депигментированных участков (минимум 2), с пограничной зоны между нормальной и лишенной пигмента кожи (1), а также один образец с нормальной кожи.

– Гиперпигментация: гистобиоптаты получают с пигментированных участков (минимум 2), а также один образец с нормальной кожи.

2) Интерпретация гистологического заключения

Обычно дерматогистопатолог выдаёт заключение, которое должно содержать следующие разделы:

1. Описание образца тканей

2. Морфологический диагноз

3. Этиологический диагноз (при возможности определения причины)

4. Комментарии

Гистологическое описание представляет собой информацию, которую видит патолог в препаратах. Гистологическое описание содержит ценную информацию с использованием множества терминов, что имеет огромное значение в диагностике. Однако требуется значительный опыт для объяснения этих увиденных изменений, поэтому клиницисту не всегда стоит доверять интерпретации заключения патолога. Знание базовой терминологии крайне необходимо для корректной интерпретации заключений лаборатории. К сожалению, большинство клиницистов вообще не читают описательную часть.

Морфологический диагноз представляет собой краткое изложение патологических изменений в гистологическом образце в одном предложении (что-то подобное: выраженная гиперплазия с образованием корок и периваскулярной эозинофильной инфильтрацией с чесоточными клещами в роговом слое). Морфологический диагноз основывается на терминах, использованных в описании гистопатологического образца.

Этиологический диагноз возможен, когда гистопатология специфична для какой-либо болезни. Например, в описанном выше случае, этиологический диагноз – «саркоптоз». Если этиологический диагноз установить не представляется возможным, патолог предлагает список дифференциальных диагнозов и, возможно, рекомендации по дальнейшей диагностике.

Клиницист никогда не должен вслепую полагаться на заключение, очень важно, чтобы врач связывал воедино клиническую картину и гистопатологическую информацию. Существует большое число болезней, диагноз которых может быть установлен гистологически, но многие из них можно подозревать по характерным признакам.

Наиболее частые гистопатологические заключения будут приведены ниже.

Эпидермальные нарушения

2. Гиперплазия – это неспецифический ответ эпидермиса на хроническое воспаление или травму, наблюдается при многих воспалительных процессах, сопровождающихся зудом.

3. Субкорнеальные и интраэпидермальные пустулы – как правило, встречаются при поверхностной пиодермии, а также при листовидной пузырчатке и некоторых редких стерильных пустулярных болезнях.

4. Субэпидермальные пустулы и везикулы – это очень редкий признак, встречается при наследственных и аутоиммунных болезнях, например, при обыкновенной пузырчатке.

5. Некрозы и язвы – обычно наблюдаются при ожогах, контактном дерматите, пиотравматическом дерматите («горячие пятна»), синдроме зуда в области головы и шеи у кошек, эозинофильном комплексе у кошек. Более редкими причинами является гепато-кожный синдром, мультиформная эритема/ токсический эпидермальный некролиз, некоторые лекарственные реакции, вирусные болезни кошек (вирус коровьей оспы, герпес-вирус), тимома у кошек. Язвы могут быть вторичными поражениями вследствие серьёзных болезней кожи, таких как васкулит.

Поражения дермы

1. Поверхностные поражения дермы – достаточно редки, могут наблюдаться при пиодермии кожно-слизистых зон, волчанке, мультиформной эритеме, эпителиотропной лимфоме, тимоме (у кошек), дерматомиозите.

3. Фолликулит/фурункулёз – в большинстве случаев указывает на поражение кожи инфекционной природы, вызванное, например, стафилококками, дерматофитами или демодексами. Другими причинами могут быть эозинофильный фурункулёз, листовидная пузырчатка, эпителиотропная лимфома.

5. Панникулит – этот признак можно наблюдать при глубоких подкожных бактериальных, микобактериальных и грибковых инфекциях, при стерильном нодулярном, идиопатическом панникулите, панстеатите, волчанке, также при местной реакции на инъекции, травмы. Может быть следствием панкреатита.

6. Васкулит - этот признак говорит о непосредственном повреждении кровеносных сосудов. Васкулит может присутствовать при весьма разнообразных процессах, таких как септический васкулит, иммуноопосредованные болезни, а также вследствие воздействия лекарств.

7. Атрофия – наблюдается при эндокринных болезнях, некоторых специфических алопециях, таких как сезонная алопеция боковой поверхности тела, паранеопластический синдром и ишемическая дерматопатия.

Подводя итог, можно сказать, что если у животных с признаками алопеции, шелушением и корочками, макулами, папулами, пустулами мне не удаётся установить диагноз путём проведения всех вышеперечисленных быстрых тестов, я прибегаю к проведению гистобиопсии. Нужно помнить, что в ряде случаев гистологическое исследование малоинформативно (например, у животных с хроническим зудом), поэтому хочу отметить крайнюю важность быстрых тестов у этих пациентов, а также необходимость клинической оценки и тщательного анализа анамнестических данных ветеринарным специалистом.

Литература

1. Cowell R.L., Tyler R.D., Meinkoth J.H., DeNicola D.B. Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Cat, 3rd ed., Mosby Elsevier, 2008.

2. Raskin R.E., Meyer D.J. Canine and Feline Cytology, Saunders Elsevier, 2nd ed., 2010.

3. Mc. Cullough S., Brinson J. Clinical Techniques in Small Animal Practice, Vol.14, No.4, November, 1999.

4. Taylor S.M. Small Animal Clinical Techniques, Saunders Elsevier, 2010.

Для того, чтобы определить, в каком состоянии находится пациент, от какой болезни он страдает, врач часто может применить использование мазка-отпечатка. Данный метод широко распространен в самых разных сферах медицины. Дерматологи, гинекологи, урологи, онкологи - все они с разной периодичностью прибегают к нему. Исследование мазка позволяет оперативно определить патологию и назначить грамотный курс лечения.

Мазок-отпечаток - это медицинский препарат, он готовится к использованию через прижатие тканей к предметному стеклу. Надежно зафиксированный и окрашенный отпечаток исследуется под микроскопом.

Мазок-отпечаток применяется для решения самых разных задач. Чаще всего его используют для:

Не существует одного общего способа взятия мазков. Метод, используемый врачом, будет отличаться в зависимости от проблемы пациента и цели, которая будет поставлена перед исследованием.

Для мазка может использоваться биологический материал из разных частей тела. Если речь идет о диагностике рака груди, то отдаляемое для отпечатков будет взято врачом из сосков пациента. При обнаружении инфекции для мазка будет взят гной из той части тела, которая и пострадала при воспалении. Наиболее часто используются для мазка выделения из полостных органов.

Проблемная зона может находиться не только на поверхности кожи, но и под ней. Если врач столкнется с подобной ситуацией, для получения отпечатков ему придется вскрыть кожный покров. Для взятия мазка из труднодоступных мест используются специальные приспособления - тампоны, щеточки. Отделяемое остается на них, а затем бережно распределяется по предметному стеклу.

Мазок-отпечаток с язвы на половых органах

Урологам, венерологам и гинекологам чаще всего приходится брать отпечатки с половых органов своих пациентов. Обычно судить о характере инфекции можно, сделав соскоб из уретры или мочеипускательного канала. Если больной страдает от не самой серьезной болезни, этого может быть достаточно. Однако далеко не всегда инфекция поражает уретру.

Венерические заболевание, то есть заболевания, приобретенные половым путем, в первую очередь, поражают не уретру, а слизистую оболочку. Это характерно как для сифилиса и генитального герпеса, так и для ряда аналогичных болезней. У больного, испытывающего венерические проблемы, на слизистой в промежности образуются язвы, и мазок-отпечаток берется прямо с этой пораженной области.

Для того, чтобы исследовать мазок, взятый с язвы, специалисты применяют темнопольную микроскопию. В некоторых случаях она не сможет с абсолютной точностью определить болезнь. Однако если в результате исследования отпечатков будут обнаружены трепонемы, врач, не сомневаясь, диагностирует у больного сифилис.

Также темнопольная микроскопия позволяет отличить язвы, возникающие при герпесе, от любых других заболеваний.

Мазок-отпечаток головки пениса

В качестве объекта для мазка у мужчины часто используется головка его полового члена. Поводом для этого может послужить баланопостит, при котором воспаляется сама головка или покрывающая ее крайняя плоть.

Мазок, взятый с головки, позволяет определить целый ряд проблем. Он может обнаружить кокки, кишечную палочку, грибковую инфекцию и ряд других заболеваний.

Если баланопостит, по подозрению врача, имеет герпетическое происхождение, мазок-отпечаток будет взят не только с головки, но и с появившихся на коже везикул. Если в везикулах будут обнаружены клетки Тцанка, значит, пациент страдает от генитального герпеса. Полученный биологический материал окрашивается при исследовании. Данная процедура возможна лишь при возникновении везикул.

Мазок-отпечаток для цитологического исследования

Цитологическое исследование отпечатков проводится онкологами, чтобы обнаружить в полученном после мазков биологическом материале атипичные клетки, свидетельствующие о том, что больной страдает раком. В этом случае мазок-отпечаток берется с опухоли, которая может располагаться не только на половых органах, но и на других участках кожи.

При цитологическом исследовании оценке подвергается весь клеточный состав: измеряются размеры ядер, клеток.

Методика позволяет диагностировать не только рак, но и другие процессы, не имеющие отношения к онкологии.

Подготовка к взятию мазка-отпечатка

Пациент не может прийти в больницу и тут же пройти эту процедуру. Она требует длительной подготовки. Если у больного подозревается инфекция, перед взятием мазка ему не стоит принимать антисептики и антибиотики, так как они способы исказить клиническую картину и даже замаскировать инфекцию.

Больному не стоит мыть место, из которого будет взят мазок. Если же это необходимо в силу гигиенических причин, промыть место можно обычной проточной водой без использования мыла и других чистящих средств.

Взятию мазка могут препятствовать налеты, везикулы и прочие образования, появившиеся на коже. В таком случае перед началом процедуры они будут удалены.

Как изучают мазок-отпечаток?

Для исследования взятого мазка необходим микроскоп. Предметное стекло, на которое помещается биологический материал, должно быть абсолютно чистым и сухим.

Препарат может быть зафиксирован различными методами. Обычно для фиксации используются жар, 95%-ный этиловый, метиловый или сулемовый спирт, пары уксусной кислоты. Выбранный метод зависит от лаборатории, в которой будет проводиться исследование. Сегодня для фиксации активно применяются специально выведенные препараты, являющие собой смесь ряда химических веществ.

Фиксатор имеет определяющее значение для эффективности всей процедуры. Если специалистом будет использован недостаточно качественный раствор, он окажет пагубное воздействие на структуру клеток в мазке и, вероятно, даст ложноотрицательный результат. По итогам анализа больному будет сообщено, что он абсолютно здоров, но на самом деле это не так. Лишь качественный раствор для фиксации способен сохранить верное расположение всех клеток мазка и выявить среди них бактериальные образования.

Зафиксированный материал подвергается окрашиванию, которое бывает ориентировочным и дифференциальным.

В норме у женщины вне лактации отсутствуют выделения из груди. Жидкость (экссудат), вытекающую из молочной железы, анализируют путем взятия мазков-отпечатков. Исследуется также содержимое кист и кожных язв.

Для чего берется анализ - мазки из молочной железы

С помощью этого метода определяется болезнь, вызвавшая появление выделений из молочных желез. Проводится цитологический анализ жидкости на определение клеточного состава. При злокачественных опухолях в мазке определяются атипичные (раковые) клетки. С помощью мазков-отпечатков диагностируют:

• рак груди
• мастопатии и маститы;
• галакторею - выделение молока их желез, связанное с гормональным сбоем;
• туберкулез молочных желез;
• доброкачественные образования;
• закупорку и расширение протоков;
• содержимое кист и раневых поверхностей

Как проводится обследование молочной железы

Отделяемое из сосков и ран на коже наносят на стеклышко, подсушивают и отправляют в лабораторию.

Для исследования содержимого кист проводится пункция с забором жидкости. Укол делается тонкой иглой, поэтому обезболивание не требуется. После взятия анализа больная идет домой. К месту прокола женщина дома прикладывает лед. Пунктат наносят на стекло и отправляют на исследование.

Процедура проводится амбулаторно и не требует госпитализации. Перед ней нельзя принимать препараты, изменяющие свертываемость крови. В день исследования запрещено наносить на грудь и подмышечную область крема, спреи, дезодоранты.

Результаты исследования мазков молочной железы

В лаборатории материал окрашивают и рассматривают под микроскопом:

• при травмах и незлокачественных заболеваниях молочных желез в жидкости присутствуют кровь и лейкоциты. Могут обнаруживаться клетки доброкачественных опухолей. В этом случае женщину обследуют дополнительно;
• при раке молочной железы в отделяемом находят атипичные (раковые) клетки - большие, неправильной формы с несколькими мелкими «ядрышками». Точность анализа приближается к 100% . Во время исследования определяют тип злокачественной опухоли;
• при начальных стадиях рака груди измененные клетки в мазке определяются не всегда. В 15% онкологический процесс выявляют другими методами – УЗИ доплерографией, МРТ. При сомнительном результате женщину обследуют повторно.

Взятие мазков-отпечатков из молочной железы - малотравматичный и информативный метод диагностики рака и других патологий молочной железы.

На чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю стерильной воды, которая должна равномерно растекаться, не разбиваясь на капельки. Не следует при этом наносить на стекло очень крупные капли воды. В каплю вносят немного исследуемого материала и тщательно его перемешивают, равномерно распределяя тонким слоем. При изготовлении мазков из жидких питательных сред взятый петлей материал не разбавляется водой. Мазки из сред, содержащих сахар, готовятся с добавлением к капле исследуемой жидкости небольшой капельки стерильного обрата или яичного белка.
Приготовленные мазки высушивают обычно при комнатной температуре. Для ускорения высыхания препараты можно подогреть, держа при помощи пинцета Корнэ предметное стекло с мазками, находящимися на их верхней стороне, в теплом воздухе высоко над пламенем горелки (рис. 41).

Осторожное высушивание препятствует быстрому и грубому осаждению белков протоплазмы бактерий и сохраняет этим самым их структуру. Правильно высушенные препараты хорошо фиксируются. Фиксация обеспечивает лучшее прилипание мазка к стеклу и делает его более восприимчивым к окраске. Самым распространенным и пригодным почти во всех случаях является способ фиксации мазков жаром. Для этого стекло с препаратом мазком вверх проводят трижды через пламя спиртовой или газовой горелки. Температура нагретого стекла должна быть такой, чтобы при соприкосновении его с кожей тыльной стороны руки ощущался бы легкий ожог. Не следует перегревать стекло, так как это портит мазок и сильно изменяет структуру бактерий. Фиксация жаром применяется при изучении отношения бактерий к окраске по Граму, выявления кислотоустойчивости и содержания липоидов. Для исследования внутренней структуры бактерий этот метод совершенно непригоден. В таких случаях для фиксации используют различные химические вещества. Наиболее употребляемыми являются следующие приемы фиксации:
- 95%-ным этиловым спиртом в течение 10–20 мин, если спирт более слабый, то время фиксации удлиняется; смесью равных объемов этилового спирта и эфира (жидкость Никифорова); на препарат наносят несколько капель смеси и дают им испариться;
- смесью этилового спирта и формалина (формалина 5 мл, спирта 95 мл) – 5–10 мин;
- безводным метиловым спиртом в течение 2–3 мин; спирт сливают, а препарат высушивают;
- парами формалина или уксусной кислоты – 5–10 мин; парами 1–2%-ного раствора осмиевой кислоты; препарат помещают на подставку в закрытую склянку с осмиевой кислотой и выдерживают 3–5 мин;
- жидкостью Карнуа (96°-ного этилового спирта – 60 мл, хлороформа – 30 мл, ледяной уксусной кислоты – 10 мл) – 15 мин;
- ацетоном в течение 5 мин;
- 10%-ным раствором азотнокислого серебра – 10 мин;
- 1%-ным раствором сулемы в течение 10–15 мин, после чего препарат промывают раствором поваренной соли и водой;
- жидкостью Буэна такого состава: насыщенного водного раствора пикриновой кислоты – 75 мл, формалина неразбавленного – 25 мл и ледяной уксусной кислоты – 5 мл.
Приготовление отпечатков
В связи с возросшим интересом в последние годы к изучению тонкого строения бактерий были разработаны разнообразные и эффективные способы фиксации бактерий, нанесенные на стекло в виде отпечатков. В таком препарате-отпечатке сохраняется более или менее точно взаимное расположение клеток в бактериальном газоне. Метод отпечатков заключается в том, что из агара в чашке Петри с засеянными на нем бактериями вырезают блок и переносят на предметное стекло. Затем берут обезжиренное предметное стекло и прикладывают его к поверхности блока, засеянного бактериями, получая таким образом первый отпечаток. Отпечатки делают до тех пор, пока не истощится слой бактерий на блоке, располагая их слева направо, начиная от левой короткой грани стекла. Затем дают отпечаткам подсохнуть и помещают стекло в жидкость Карнуа для фиксации. Хорошие результаты дает также фиксация осмиевой кислоты. В литературе описаны и другие методы фиксации отпечатков.