Какие анализы сдавать на хеликобактер пилори. Диагностика инфекции Нelicobacter pylori Положительный анализ кала на хеликобактер

Хеликобактер пилори

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет увеличить число копий ДНК бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК. Синтезированное количество ДНК идентифицируют методами иммуноферментного анализа или электрофореза. ПЦР-диагностика позволяет обнаружить возбудителя на самых ранних этапах инфекционного процесса, в любой биологической среде организма, с возможностью количественного определения вирусов или бактерий.

Хеликобактер пилори – спиральные грам-отрицательные бактерии, которые были обнаружены на слизистой оболочке желудка более полувека назад, но они не вызывали особого интереса до начала 1980-х гг., когда был разработан метод культивирования организмов из биопсийного материала слизистой оболочки.

В 1983 г. австралийский врач Барри Маршалл обнаружил, что H. pylori почти всегда присутствует в желудке пациентов, страдающих хроническим гастритом или язвой. Бактерии, сами по себе, язвы желудка или двенадцатиперстной кишки не вызывают, однако, провоцируют воспалительные процессы в желудке и ослабляют естественную защиту слизистой от воздействия кислотной среды желудка; при этом H. pylori стимулирует гиперсекрецию соляной кислоты, воздействуя на механизмы ее регуляции. Если проводимая терапия приводит к снижению кислотности желудка, то язва может затянуться, но после прекращения лечения существует вероятность ее повторного возникновения. Длительные наблюдения показали, что у больных, не получавших лечение против H. pylori, язва рецидивирует через 2 года в 100 %, а у пролеченных пациентов возникает повторно (обычно вследствие реинфекции H. pylori) только в 5-10 %. Источником заражения H. pylori является инфицированный человек, кошки, свиньи, крупный рогатый скот и обезьяны (макака-резус). Чаще заражение происходит через загрязнённую фекалиями воду и пищу (овощи, при поливе которых использовалась загрязненная вода). Объектом передачи инфекционного начала могут быть загрязнённые руки, слюна, капли слюны или мокроты при кашле. Исследования, проведенные медиками из США, показали, что H.pylori можно считать семейной инфекцией, и, если в семье выявлен носитель H.pylori, то вероятность остальных членов семьи оказаться инфицированными составляет 95%. Обнаружение хеликобактера методом ПЦР позволяет значительно быстрее установить диагноз, проводить контроль лечения. Материалом для исследования могут служить желудочные аспираты, кал, слюна.

Обращаем Ваше внимание, что взятие урогенитального мазка, мазка из зева, носа, полости рта - платное.

При разных заболеваниях желудочно-кишечного тракта требуется проходить комплексное обследование. Если выявляют бактерию Хеликобактер пилори в кале, то диагностируют гастрит, язву, дуоденит и другие более серьезные болезни. Собирать регулярно каловые массы на определение количества патогенных микроорганизмов требуется и во время медикаментозной терапии, чтобы была возможность следить за положительной динамикой терапии.

В каких ситуациях назначается?

Сдавать каловые массы на анализ требуется при разных патологических нарушениях в системе пищеварения. Бактерии Хеликобактер пилори определяют несколькими методиками, каждая из которых применяется при различных нарушениях. ПЦР анализ кала на антиген нужно сдавать в таких случаях:

• язвенная болезнь желудка;
• образование эрозий в 12-персной кишке и других органах ЖКТ;
• атрофический процесс в слизистой оболочке;
• полипы и новообразования;
• гастроэзофагеальный рефлюкс, характеризующийся забросом желудочного содержимого в пищевод;
• генетическая предрасположенность к разным патологиям органов брюшной полости.

ПЦР-исследование кала - самый точный метод контроля состояния микрофлоры желудка при лечении антибактериальными препаратами.

Патогенная микрофлора провоцирует нарушение стула.

Также можно сдать иммунологический тест, проводимый в таких случаях:

• нарушенный стул, изжога, чувство дискомфорта и другие патологические проявление дисфункции пищеварительного тракта;
• перед проведением курса приема антибиотиков;
• железодефицитная анемия либо тромбоцитопения неопределенного происхождения;
• генетический фактор;
• наличие инфекции у ближайшего окружения.

Подготовка: что надо знать?

Антигенный анализ кала на наличие H. Pylori может дать ложные результаты, если не придерживаются следующие рекомендации:

• За несколько суток до проведения лабораторной манипуляции отказываются от приема антибактериальных и слабительных медпрепаратов. Если терапию прекратить невозможно, то о ней предупреждают доктора.
• Собрать материал для обследования необходимо в предварительно помытую тару, лучше использовать стерилизованную емкость, которую приобретают в аптеке. Категорически запрещено для анализа на Хеликобактер пилори использовать кал после клизмы или применения препаратов со слабительным действием. В таких случаях достоверность результатов низкая.
• Собранный материал доставляют в лабораторию не позже, чем через 12 часов после забора. Если сразу же не удалось сдать анализ на диагностику, то материал хранится на протяжении суток при температуре 2-8 градуса.
• Повторный анализ кала на Хеликобактер пилори сдается спустя месяц после проведения антибактериальной терапии.

Особенности проведения

ПЦР - основной молекулярный способ диагностики

Молекулярно-генетическая диагностика выявит наличие фрагментов ДНК бактерии.

Исследование каловых масс на полимеразную цепную реакцию позволяет выявиться ДНК и РНК бактерии Хеликобактер пилори. Методика относится к молекулярной биологии, вследствие которой фрагменты ДНК патогенного микроорганизма увеличивают в многократном размере. Проводят анализ кала на ПЦР при помощи таких средств:

• Праймер. Помогает обнаружить и обозначить необходимый фрагмент.
• Полимераза. Фермент, который копирует зафиксированный участок цепочки ДНК.
• DNTP. Химические вещества, необходимые для выстраивания новой цепи.
• Образец для анализа.
• Буферный раствор. Посредством жидкости создается максимально приближенной условие для полимеразной цепной реакции.

Методом ПЦР удается накопить специфические участки ДНК в геометрической прогрессии, вследствие процедуры получается из 1-й молекулы больше 100 млн таких же. При помощи такого лабораторного способа исследования кала возможно определить присутствие Хеликобактер пилори даже в небольшом объеме. Если цепь при диагностике не образуется, значит результат теста негативный.

Преимуществом метода ПЦР является автоматизированность, при котором человек принимает минимальное участие в обследовании.

Культуральная методика

Суть анализа в создании питательной среды для жизнедеятельности бактерии.

Хеликобактер пилори может быть обнаружен посредством бактериологического посева кала. Способ диагностики относится к микробиологическим методам. Полученный материал помещают в особую среду, которая является благоприятной для размножения бактерии. Через определенный временной промежуток изучают выросшую культуру при помощи микроскопа. При лабораторном исследовании применяется окрашивание и другие способы, помогающие верно идентифицировать колонию. Помимо этого, выполняется тест на чувствительность к антибиотикам, благодаря чему проще подобрать лечение против Хеликобактер пилори.

Современные диагностические методы позволяют узнать многое о состоянии здоровья человека по его биологическим жидкостям: крови, моче, фекалиям.

Исследуя кал, можно узнать, поселилась ли в организме , способная вызывать гастриты, и провоцировать онкопатологию.

Кал на наличие или отсутствие данного микроба можно изучать тремя способами: культуральным, иммунологическим, и наиболее достоверным и распространённым – методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР).

Сама бактерия крайне редко встречается в фекалиях в своей привычной S-образной форме целиком. Толстый кишечник и каловые массы не являются благоприятной средой для микроорганизма, поэтому, попадая в них, она может принимать круглую кокковую форму, изредка встречаясь в испражнениях именно в таком виде.

Культуральный метод подразумевает под собой посев части исследуемого материала на питательную среду, в которой бактерия будет хорошо себя чувствовать и начнёт размножаться.

Таким образом:

Происходит рост колоний, которые анализируются, окрашиваются специальными реактивами и исследуются под микроскопом. Данным способом в прямом смысле выращивают патогенные микробы с целью их дальнейшего изучения.

Кроме обнаружения самой бактерии, метод позволяет установить чувствительность патогена к тому или иному антибиотику. Если при добавлении лекарственного препарата рост колонии сохраняется – Н.руlori устойчива к антибактериальному средству, а если микроорганизмы погибают – имеет смысл назначить данный препарат пациенту с целью лечения и эрадикации, бактерии чувствительны к нему.

Культуральный способ весьма достоверен, но только в том случае, если во взятом биологическом материале обнаружена S-форма микроба. Метод имеет свои недостатки, и по этой причине не слишком распространён:

• Сроки исследования занимают от 6 до 12 дней
• Дорогостоящие среды для высевания хеликобактерий
• Специфические условия для сред, обеспечивающие рост колонии, которые сложно воспроизвести в лаборатории
• Редкая встречаемость S-образных форм бактерии в испражнениях, пригодных для роста в питательных условиях (кокковые формы не исследуют)

Определение антигена хеликобактер пилори в кале иммунологическим методом

Фекалии пациента могут быть подвергнуты иммунологическому исследованию, которое позволяет выявить уже не сам микроорганизм, а его части – антигены.

Для этого:

Используются специальные антитела, направленные на обнаружение чужеродного антигена – частей бактерии, продуктов её жизнедеятельности, генетического материала.

Взаимодействуя с чужеродным агентом, антитела образуют специфический комплекс, который и определяется иммуно-ферментным анализом.

Данный способ изучения кала редко применяется в России, не многие лаборатории оснащены необходимыми реактивами и необходимыми тестами.

Но в перспективе возможно включение данного способа обнаружения хеликобактер в качестве скрининг-тестов: исследования широких групп населения на заражённость бактерией.

Анализ кала ПЦР на хеликобактер пилори

Это наиболее распространённый метод исследования фекалий на данную бактерию, обладающий высокой точностью.

Суть способа в следующем:

Из биологического материала пациента выделяется участок ДНК бактерии, который затем многократно искусственно дублируется на специальном аппарате, так происходит восстановление гететического кода Н.руlori

Когда геномный фрагмент микроба достигает достаточных размеров, его сравнивают с эталонным и делают вывод об исследуемом микроорганизме: хеликобактер ли это или другой патоген.

Положительный ПЦР анализ означает наличие в организме человека хеликобактерной инфекции: бактерия присутствует в желудке, ее фрагменты ДНК обнаружены в кале и совпали с эталонными.

Достоинства ПЦР-метода:

• Высокая точность: даже незначительного количества генетического материала достаточно для исследования с большим процентом достоверности, приближающимся к 99%.
• Быстрота исследования. 2 суток достаточно для анализа, но существуют экспресс-способы, позволяющие установить диагноз за несколько часов.
• Безболезненность. Способ атравматичен, неинвазивен. Позволяет обследовать маленьких детей, пожилых, ослабленных пациентов, которым противопоказана ФГДС с биопсией и другие эндоскопические манипуляции.
• Для точного результата не обязательно обнаружение ДНК-фрагментов именно S или спиралевидных форм, части кокковых микробов (наиболее встречающихся в испражнениях) тоже подходят для анализа.

У ПЦР-диагностики значительно больше плюсов, чем минусов. К недостаткам можно отнести:

• Относительно высокую стоимость анализа.
• Сохранение фрагментов ДНК микроба в фекалиях и после эрадикации. Даже если лечение успешно пройдено и бактерия отсутствует в организме, ещё спустя какое-то время фрагменты ДНК обнаруживаются в биологическом материале и стул тест на хеликобактер может дать положительный результат. Поэтому с целью контроля излеченности рекомендуется ПЦР-диагностика не ранее, чем через 1 месяц после окончания терапии.
• Специальная дорогостоящая высокотехнологичная аппаратура, для работы на которой необходим подготовленный и обученный персонал.

Анализ кала на антиген хеликобактер пилори инвитро

Все диагностические исследования, проводимые с фекалиями пациента, относятся к манипуляциям ин витро – «в пробирке», «в стекле», вне организма человека.

Они обладают достаточно высокой точностью и информативностью, если преследуют цель обнаружения микроба.

Но не все процессы, происходящие «ин виво» — внутри человеческого организма, можно с той же достоверностью воссоздать «ин витро». К примеру, определение чувствительности к антибиотикам, анализируемую культуральным методом.

При исследовании антибактериальной чувствительности колоний микробов на питательных культурах, было выявлено, что самые подходящие препараты для бактерий ин витро, «не работали», оказывались малоэффективными при лечении пациента.

Результаты исследований чувствительности бактерии к антибиотикам «в пробирке» не всегда точны.

Как сдать анализ кала на хеликобактер пилори

Достоверность анализа кала на хеликобактер

ПЦР — диагностика фекалий наиболее достоверна из всех трех вышеописанных способов, она в какой-то степени уступает лишь биопсийному эндоскопическому исследованию.

ПЦР-анализ кала редко дает ложноположительные результаты, обладает высокой специфичностью, позволяет исследовать ДНК-материал часто встречаемых кокковых форм хеликобактерий в испражнениях.

Достоверность культурального и иммунологического метода ниже, чем ПЦР. Эти методы «грешат» появлением ложноположительных результатов, но в совокупности с другими способами выявления Helicobacter pylori, они являются прекрасным подспорьем для постановки диагноза.

Антиген H.pylori в фекалиях

В случае, если в кале обнаружен антиген хеликобактер пилори либо ДНК-фрагмент исследуемого микроорганизма, это означает, что:

• Человек инфицирован Н.руlori.
• Эрадикационная терапия недостаточно эффективна и микроб не исчез из слизистой оболочки ЖКТ.
• Прошло меньше месяца после терапии и в кале сохраняются антигены умертвлённых патогенов.

Чтобы исключить ложноположительный результат после прохождения схемы антихеликобактерной терапии (когда анализ положительный, а организм человека не содержит Н.рylori), следует не торопиться узнавать эффективность лечения, а выждать не менее одного месяца после его окончания.

Если проведено успешно, спустя 1 месяц после эрадикации в кале не выявляются антигены и ДНК микроба. Результат обследования – отрицательный.

В случае выявления антигенов при первичном анализе, врач порекомендует пациенту пройти курс специальной терапии, направленной на уничтожение Н.руlori.

[09-053 ] Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

1025 руб.

Заказать

Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.

Синонимы русские

Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA .

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, кал.

Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.

H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.

Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.

На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.

Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.

Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:

• атрофического или антрального гастрита;
• язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
• При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

• текущая H. pylori-инфекция;
• H. pylori-инфекция в анамнезе.

Отрицательный результат:

• отсутствие H. pylori-инфекции.

Что может влиять на результат?

• Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
• Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Важные замечания